本方法适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混料饲料、维生素预混合饲料维生素A及维生素D、维生素E的测定。参考标准GB/T17817-2010《饲料中维生素A的测定高效液相色谱法》、 GB/T 17818-2010 《饲料中维生素D3的测定高效液相色谱法》、GB/T 17812-2008 《饲料中维生素E的测定高效液相色谱法》。

1、方法原理    

维生素预混料中的维生素A乙酸酯、维生素D3、维生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）用甲醇溶液提取，试液注入高效液相色谱柱，用紫外检测器在275 nm处测定，外标法计算维生素A、维生素D3、维生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）含量。

2、主要仪器设备

    1)高效液相色谱仪L210，带紫外检测器（上海仪电分析仪器有限公司）；

    2)超声波水浴；

    3)电子天平；

    4)真空抽滤装置。

3、实验方法

1、混合标样配置

维生素A乙酸酯、维生素D3、维生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）标准贮备液：准确称取维生素A乙酸酯、维生素D3、维生素E (dl-α-生育酚乙酸酯)各10.0 mg，置于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释到刻度，混匀，4℃下保存。该贮备液浓度为0.1 mg/mL。

维生素A乙酸酯、维生素D3、维生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）混合标准工作液：准确吸取各标准贮备液若干毫升于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀。

2、试样溶液的制备

称取试样1.00 g置于100 mL棕色容量瓶中，加入约80 mL甲醇，于 65 ℃超声波水浴中超声提取30 min，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，充分摇匀后过0.45 μm滤膜过滤。将试样溶液进一步稀释至合适浓度，用于实验分析。

3、高效液相色谱仪参考条件

色谱柱：C18 4.6 mm(i.d)×150mm；

流动相：95%甲醇

流速：1 mL/min；

柱温：室温

波长：275 nm；

测定：取相同体积试样制备液和标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间按定性，外标峰面积法定量。

4、实验结果

4.1 混合标准溶液高效液相色谱图

 

1.维生素A乙酸酯   2.维生素D3   3.维生素E

4.2工作曲线的绘制

        维生素A乙酸酯工作曲线见下图，线性相关系数：0.9998

维生素D3工作曲线见下图，线性相关系数：0.9998

维生素E工作曲线见下图，线性相关系数：0.9992

4.3预混料实际样品色谱图