非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳:

1仪器：垂直系列电泳槽；低、中、高压电源；恒温循环器

2试剂：丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED、考马斯亮蓝硝酸银、凝胶缓冲液、非变性上样缓冲液、Tris碱、甘氨酸等

聚丙烯酰胺凝胶电泳

变性聚丙烯酰胺凝胶电泳1仪器：垂直系列电泳槽；低、中压电源、恒温循环器2试剂：丙烯酰胺、N,N’-甲叉双丙烯酰胺，SDS（十二烷基硫酸钠）溶液、1.5MTris-HCl(pH8.8）、0.5MTris-HCl(pH6.8）、TEMED、10%(w/v)过硫酸胺溶液、SDS-Page上样缓冲液:（0.5M Tris（pH6.8）缓冲液、甘油、10%SDS、二硫苏糖醇、溴酚蓝）、Tris、甘氨酸、SDS、考马斯亮蓝硝酸银等

SDS-Page，在蛋白质裂解液中加入SDS和疏基乙醇或DTT

巯基乙醇或DTT可使蛋白质分子中二硫键还原，使多肽分成单个亚单位。


PAGE据其有无浓缩效应，分为连续系统与不连续系统

连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷及分子筛效应；不连续系统电泳体系中由于缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应、分子筛效应，还具有浓缩效应，故分离效果更好。不连续的聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质，利用凝胶层的不连续性、缓冲液离子的不连续性、PH的不连续性及电位梯度的不连续性，使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带，然后进行分离。

样品浓缩效应

1）凝胶孔径的不连续性：浓缩胶为大孔胶；分离胶为小孔胶。在电场作用下，样品颗粒在大孔胶中泳动的阻力小，移动速度快；当进入小孔胶时，受到的阻力大，移动速度减慢。因而在两层凝胶交界处，样品迁移受阻而压缩成很窄的区带。

2）电位梯度的不连续性：电泳开始后，快离子的快速移动会在其后形成一个离子强度很低的低电导区，使局部电位梯度增高，将蛋白质浓缩成狭窄的区带

缓冲体系离子成分及pH值的不连续性

Tris:缓冲配对离子，维持溶液的电中性及pH值Cl-:在电场中迁移率快，前导离子(leading ion)，快离子。Gly:其pI=6.0，在pH6.8的浓缩胶缓冲体系中，甘氨酸解离度很小，因而在电场中迁移很慢，称为尾随离子（trailing ion），慢离子。当进入pH8.8的分离胶时，甘氨酸解离度增加，其有效迁移率超过蛋白质;因此Cl-及NH2CH2COO-沿着离子界面继续前进。高电势梯度不存在了，各种蛋白质仅会由于其分子量或构型的不同，在一个均一的电势梯度和pH条件下通过一定孔径的分离胶时所受阻滞的程度不同，表现的泳动率的不同被分开大多数蛋白质在pH6.7或8.3时均带负电荷，在电场中，都向正极移动。